冷凍離心機單核細胞分離技術

時間：2015年12月22日信息來源：湘智離心機字體：大中小【打印此頁】

單核細胞分離技術
　　
　　(一)鐵粉吸附法
　　
　　1．材料及試劑
　　
　　(1)鐵粉或羰基鐵粉(Atomergicchemetals)99％的純度，顆粒小于60µm(GoodfellowMetals)。
　　
　　(2)強磁鐵(馬蹄形)。
　　
　　(3)一塊小棒狀磁鐵(約1cm長)。
　　
　　(4)毛細吸管等。
　　
　　2．操作方法
　　
　　(1)稱取一定量的鐵粉，一般為10g，用100ml生理鹽水洗滌4次，去除任何可溶性有毒物質。在倒去鹽水時，用強磁鐵吸住鐵粉。
　　
　　(2)用50ml生理鹽水混懸鐵粉。搖勻后，分裝于10個瓶中，包扎瓶口，121℃滅菌20min，拿出后立即輕輕搖勻，防止鐵粉結塊，儲藏備用。
　　
　　(3)臨用前，倒去瓶中的生理鹽水，加入適量的單個核細胞懸液(3ml～5ml，細胞總數為8×107個／瓶)。37℃溫育45min，中間不時晃動，使鐵粉懸浮起來。
　　
　　(4)加入一塊小磁鐵棒于瓶中，讓其吸住鐵粉以及附著在鐵粉上的細胞。
　　
　　(5)倒出懸液，此懸液主要是淋巴細胞，離心，收集。
　　
　　(6)在鐵粉瓶內倒入一定量的Hank’s液，用力振搖后，以強磁鐵吸附，幾分鐘后，倒出液體。
　　
　　(7)2000r/min離心液體，管底即為單核細胞。
　　
　　(二)玻璃板吸附法
　　
　　將分離的單個核細胞傾于無菌潔凈的玻璃平皿內，置37℃30min～40min，用毛細吸管輕輕吸取懸液，即為淋巴細胞。用適量的Hank’s液沖洗平皿，收獲即為單核細胞懸液