從全血里純化單個核細胞人、大鼠和小鼠

時間：2015年12月22日信息來源：湘智離心機字體：大中小【打印此頁】

儀器：離心機（低速冷凍離心機，可使用24*15ml離心管，水平轉(zhuǎn)子）；抽血注射器（大小與抽血體積相一致）
試劑：Optiprep；Tricine-緩沖鹽溶液（TBS,僅小鼠血）0.85%（質(zhì)量濃度）NaCl，10mmol/L Tricine-NaOH（ph = 7.4）。

方法：樣品收集

1）        收集人外周血，用EDTA（1mmol/L）或檸檬酸鹽（3.8%，質(zhì)量濃度）抗凝（為了避免對結(jié)果的影響，避免使用肝素）。
2）        用CO2麻醉大鼠，收集血液（約10ml），把血液收集到含有1ml 3.8%（質(zhì)量濃度）檸檬酸鹽的10ml注射器里。
3）        用CO2麻醉小鼠，收集血液，把血液收集到含有0.1ml 3.8%（質(zhì)量濃度）檸檬酸鹽的2ml注射器里。

細胞的分級分離

1）        取1.25ml（用于人血）或1.26ml（用于大鼠血）Optiprep與10ml的血液輕輕混血（反復(fù)顛倒）。對于小鼠血液（0.5~1.0ml），5.0ml TBS與1.5ml Optiprep混合，然后取該混合液5ml與小鼠血液混合。
2）        在頂上鋪少量生理鹽水（0.5ml），它可以防止單核細胞在空氣/介質(zhì)分界面形成區(qū)帶，也避免細胞在血漿/離心管壁交匯處堆積。
3）        在20℃、1000~1200g離心30分鐘
4）        用吸管收集彎月面的細胞，除去距沉淀2cm以上的所有上清液。
說明：大多數(shù)細胞在血漿/生理鹽水分界面處的區(qū)帶里，但10%~15%在沉淀上面的血漿里。

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